嫦娥科研速报｜EGCG与竹叶黄酮的组合物及其制备方法和应用-获发明授权

专利名称：EGCG与竹叶黄酮的组合物及其制备方法和应用

专利号：ZL 2015 1 0228678.X

专利摘要：本发明提供含有EGCG与竹叶黄酮的药物组合物，所述药物的剂型是药剂学上可以接受的任何药物剂型，所述EGCG与竹叶黄酮以重量比为( 0 .05～2 ):1的比例组合，本发明进一步提供了所述组合物的制备方法，以及在制备保护心脑血管、保护心脑组织、改善心脑缺血的药物中的应用，在制备降低发生心肌梗死、脑卒中或心血管疾病导致的风险的药物中的应用。

专利核心：EGCG;竹叶黄酮；防护心脑血管；改善心肌缺血

专利介绍：

一、技术领域

本发明涉及一种健康品组合物，及其制备方法和应用，具体是EGCG与竹叶黄酮的组合物，以及其制备方法和应用。本发明所述的健康品组合物，包括但不限于药物、医用食品、保健食品或功能食品、普通食品等。

二、背景技术

EGCG，即表没食子儿茶素没食子酸酯，结构式如下:

EGCG是从绿茶中提取、分离得到的一种天然化合物，是茶多酚中最高效的活性单体成分，具有良好的安全性和广泛的生理活性作用，研究表明，EGCG具有抗血栓形成、抗动脉硬化、保护神经系统、抗自由基损害、抗氧化、抗氧化应激、抗血管增生、调节免疫、保护心脑血管以及抗炎、抗肿瘤、抗病毒、抗菌作用，对于人体健康十分重要。

然而，不利的是，一方面，EGCG在心脑血管方面的作用机理比较单一，缺少全方位保护心脑血管或治疗心脑血管疾病的功能作用；另一方面，EGCG的味道非常苦涩，限制了其在医药食品方面的应用，消费者或患者直接口服时难以接受其苦涩味，使其应用的依从性严重受制。

竹叶黄酮，是从禾本科刚竹属毛环竹的竹叶中提取出来的具有生理活性的生物黄酮，它是一种高效的生物抗氧化剂，是人体必需的营养素，具有保护心脑血管，改善心肌缺血、改善脑缺血、调节血脂 ,降低血液粘稠度的作用，具有防治心脑血管疾病，抗氧化、抗炎以及调节免疫的功能，当人体缺乏时，容易导致心脏和大脑功能不全、血管硬化等疾病的产生。

三、发明内容

本发明将EGCG与竹叶黄酮组合，具有良好的协同作用，尤其在保护心脑血管、保护心脑组织、改善心脑缺血等方面的协同作用，以及在降低发生心肌梗死、脑卒中或心血管疾病导致的风险的作用；另一方面，竹叶黄酮能改善EGCG的苦涩味，使消费者或患者在直接口服时易于接受。

本发明的目的是提供一种含有EGCG与竹叶黄酮的药物组合物，所述药物的剂型是药剂学上可以接受的任何药物剂型。

本发明的另一个目的是提供上述组合物的制备方法；本发明还涉及上述组合物在药物中的应用、医药用途。

四、发明优点

本发明EGCG与竹叶黄酮的组合物，具有以下两方面的优点：

1.竹叶黄酮具有特殊的味道，类似于中药的轻微苦味并有回甘味，能很好地改善EGCG的苦涩味，使得口服者易于接受；

2.EGCG与竹叶黄酮的组合物在保护心脑血管、保护心脑组织、改善心脑缺血等方面的协同作用，以及在降低发生心肌梗死、脑卒中或心血管疾病导致的风险等方面具有良好的协同增效作用，对于较为全面的防治心脑血管疾病更为有利。

五、实用性对照实验

实施例1：EGCG和竹叶黄酮的组合物在改善心肌缺血方面的作用

动物：SD大鼠，雌雄各半，体重160～190g。

心肌缺血模型：取大鼠用乌拉坦腹腔注射麻醉，仰卧固定于手术台，暴露气管，开胸前插呼吸机，在胸骨左侧3、4肋骨处开胸，暴露心脏，在左心耳根部与肺部动脉圆锥间以手术针穿线结扎左冠状动脉，关闭胸腔，形成心肌缺血模型。

实验方法：将大鼠随机分为模型对照组、给药组，其中给药组在正常喂饲基础上分别给予口服灌胃EGCG 6mg/kg、竹叶黄酮12mg/kg、EGCG与竹叶黄酮重量比1:2的组合物l0mg/kg，各给药组连续给药3天后，于第4天进行心肌缺血模型，造模成功后分别给予口服灌胃EGCG 6mg/kg、竹叶黄酮12mg/kg、EGCG与竹叶黄酮(重量比1:2）的组合物l2mg/kg ,给药后180min，立即取下心脏，用生理盐水冲洗，称量全心重(g)，沿冠状沟剪去心房及各大血管，称心室重(g)，将心室置于冰箱中冷冻后，在心脏结扎线以下，平行于冠脉沟均匀地将心室部分横断切成5片，每片厚约 1～2mm，5片的重量为扎下区的重量(g)，然后置于硝基四氮唑蓝(N-BT)染液中，37℃水浴箱中恒温染色15min后取出，正常心肌染为暗蓝色，梗死区心肌则不着色或浅黄色。绘制每片心肌两面的梗死区、非梗死区及空腔范围。用剪纸法，测量每片心肌两面的梗死区及正常心肌的重量(mg)，称出5片的总重量即为心室总重量(mg)。分别计算全心梗死区、心室组梗死区、扎下区梗死区的心肌梗死百分比（%），组间比较用t检验，结果见表1。

表1 EGCG和竹叶黄酮的组合物对心肌缺血大鼠心肌梗死范围的影响

（x¯±s，%，n＝8）

结论：本发明EGCG和竹叶黄酮的组合物在SD大鼠心肌缺血的动物模型中，能显著降低梗死面积，表现出良好的改善心肌缺血、保护心肌细胞的作用；相对于模型对照组，EGCG与竹叶黄酮的组合物组具有非常显著差异，p<0 .01；相对于竹叶黄酮组和EGCG组，也具有十分显著差异，p<0 .05。显示出本发明药物组合物在改善心肌缺血、保护心肌细胞的突出作用。

实施例2：EGCG和竹叶黄酮的组合物对缺血脑神经细胞损伤的保护作用

采用闭夹大脑中动脉制作局部特定区域急性脑缺血大鼠模型，计算死亡神经细胞数，观察神经元的形态学变化，从细胞和分子水平研究EGCG与竹叶黄酮的组合物在保护神经元和防治脑缺血损伤的作用。

方法：Wistar大白鼠，体重 150～200g，雌雄各半，随机分组，分为模型组、EGCG给药组、竹叶黄酮给药组、EGCG与竹叶黄酮组合物给药组，每组8只。

首先对大鼠行10%水合氯醛麻醉(ip ,350mg .Kg-1)后，用器械小心撬开颅骨，暴露并闭夹大脑中动脉造成局部特定区域急性脑缺血模型，以闭夹大脑中动脉侧为缺血侧(实验组)，另一侧不闭夹作为对照(对照组)。

各组均在缺血前30min行腹腔内注射药物。所有标本均取材于有代表性的相关区域，并迅速经4%中性甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，HE染色及HSP70染色。HE染色后以神经元细胞出现核固缩，核碎裂，核溶解者判为神经元死亡，在每张切片中取5个高倍镜视野，统计死亡细胞占总细胞的百分比，取其平均值。

HSP70是HSP家族中的一种，分子量为70KDa，它的主要功能是保护各种应激所致的细胞损伤和凋亡，诱导HSP70高表达可减轻脑缺血所致的神经元损伤。

实验分组：

（1）模型组：腹腔内注射等体积蒸馏水；

（2）EGCG给药组：腹腔内注射等体积的EGCG蒸馏水溶液，EGCG给药量5mg/kg；

（3）竹叶黄酮给药组：腹腔内注射等体积的竹叶黄酮蒸馏水溶液，竹叶黄酮给药量12mg/kg；(重量比1:2.4)的蒸馏水溶液，EGCG与竹叶黄酮组合物给药量12mg/kg。

结果：见表2。

表2 EGCG与竹叶黄酮的组合物对脑组织形态学改变、神经细胞死亡率及HSP70的表达情况(n=8)

由表2可以看出，EGCG与竹叶黄酮的组合物对于大鼠脑缺血具有良好的保护作用，以及保护脑组织、保护神经细胞、减轻脑组织水肿程度，在神经细胞死亡率、HSP70表达数据方面，与单独EGCG给药组、竹叶黄酮给药组相比，具有显著差异，p<0 .05。表现出本发明组合物在保护心脑血管、保护心脑组织、改善心脑缺血、保护心脑细胞的作用。

实施例3：EGCG与竹叶黄酮的组合物对改善EGCG的苦涩味的作用

取EGCG与竹叶黄酮重量比为1:0 .5、1:1、1:1 .5、1:2的组合物，进行苦涩味比较。

苦涩味标准物的制备：分别以麦芽糊精的添加量为0、10%、30%、50%、70%、90%的EGCG原粉与麦芽糊精均匀混合的粉末，各取5g，加入100ml的45℃热水，充分溶解，品尝，分别得到苦涩味程度标记为10.0分、9.0分、7.0分、5.0分、3.0分、1.0分的苦涩味标准物，最高为10.0分，保留一位小数点,分值越高，表征苦涩味越大。

苦涩味比较方法：以苦涩味标准物为基础，通过5人对待测组合物苦涩味的品尝方法，与苦涩味标准物比较、判别，对待测组合物苦涩味进行打分（最高为10.0分，保留一位小数点），取平均值，用来比较，分别比较所制备的组合物的苦涩味。

苦涩味比较数据如下表3。

表3

由3表可以看出，本发明EGCG与竹叶黄酮的组合物，与EGCG原粉比较，苦涩味大幅度下降，且随着竹叶黄酮在组合物中含量的增加，其苦涩味下降更多；EGCG与竹叶黄酮重量比为1:0 .5、1:1的组合物，其苦涩味只有EGCG原粉的百分之六十左右（p<0 .05），EGCG与竹叶黄酮重量比为1:1 .5、1:2的组合物，其苦涩味均不到EGCG原粉的百分之五十（p<0 .01）；显示出本发明组合物对改善EGCG的苦涩味具有显著作用。

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