嫦娥科研速报｜载药的人血白蛋白联合单克隆抗体在制备药物组合物中的用途-获发明授权

专利名称：载药的人血白蛋白联合单克隆抗体在制备药物组合物中的用途

专利号：ZL 2022 1 0972480.2

专利摘要：本发明涉及载药的人血白蛋白联合单克隆抗体在制备药物组合物中的用途。本发明针对endoglin制备了特异性的单克隆抗体，该单克隆抗体能够有效的抑制大肠癌细胞的增殖以及能够通过抑制endoglin的活性来直接调节其下游的TGF‑β1的表达。紫杉醇/白蛋白纳米粒子与endoglin特异性单克隆抗体联用，能够有效的提高肿瘤抑制率，具有较好的治疗效果。

专利核心：紫杉醇；白蛋白；endoglin；单克隆抗体；肿瘤抑制

专利介绍：

1.技术领域

本申请涉及生物领域，更具体的涉及一种载药的人血白蛋白联合单克隆抗体在制备药物组合物中的用途。

2.背景技术

大肠癌是常见的恶性肿瘤，包括结肠癌和直肠癌。大肠癌的发病率从高到低依次为直肠、乙状结肠、盲肠、升结肠、降结肠以及横结肠，近年有向近端(右半结肠)发展的趋势。其发病与生活方式、遗传、大肠腺瘤等关系密切。发病年龄趋老年化，男女之比为1 .65：1。目前我国每年新发癌症病例约为312万例，平均每天确诊8550人，每分钟就有6人被诊断为癌症，有5人死于癌症。每年因癌症死亡病例达270万例。

在中国五大发病最高的肿瘤里面，消化道肿瘤占到四个，那么这四个消化道肿瘤里面，实际上胃癌，食管癌，肝癌的发病是趋于平稳。但是结直肠癌的发病率还是有明显的上升趋势。结直肠癌发病率上升迅速，白领人群尤其明显、且有年轻化趋势。结肠癌和直肠癌被统称为结直肠癌或者大肠癌。大肠癌发病机制的研究一般认为，大肠癌的发病机制比较复杂，遗传物质异常、基因异常、生活饮食习惯不健康等是导致大肠癌发生的主要原因。

从遗传学的角度来看，大肠癌的发病主要表现为家族性腺瘤样息肉和遗传性非息肉大肠癌。腺瘤样息肉瘤基因具有抑制癌基因的功用，它的功能的丧失则会使p一钙连蛋白的水平上升，而β‑钙连蛋白水平的上升则直接诱导肿瘤的发生。遗传性非息肉大肠癌的发生则与配错修复系统缺陷有关。遗传性非息肉大肠癌是肿瘤的易感瘟候群，从目前的研究来看，配错修复相关基因的改变对肿瘤的形成有着很大的影响。Hmshl、Hmsh2、Hpsml、Hpsm2、GTBP基因的变化是诱发肿瘤的主要原因。除此之外，高脂肪低纤维素饮食、长期吸烟等也是大肠癌的病因。

恶性实体肿瘤的生长和转移依赖于肿瘤组织中新生血管的形成，肿瘤组织通过肿瘤血管获取营养物质、排泄代谢产物并向宿主输入肿瘤细胞，肿瘤血管与肿瘤生长、侵袭及转移密切相关，而CD₁₀₅又参与血管生成，是新生血管标志。由此可以预见CD₁₀₅在人类恶性肿瘤的诊断、预后、治疗方面发挥重要的作用。CD₁₀₅又名endoglin，为内皮细胞细胞膜表达的糖蛋白，是转化生长因子β受体复合物的成分之一，但能独立存在于细胞表面。CD₁₀₅ /endoglin通过参与TGF—β受体的信号转导，调节内皮间质的信号传递，参与血管生成，在肿瘤血管生成过程中发挥重要作用。肿瘤血管生长是肿瘤发生、生长及浸润转移的重要条件。CD₁₀₅/endoglin为抗肿瘤血管治疗提供新的治疗靶点。抑制肿瘤血管生成或选择性破坏肿瘤血管的靶向治疗，是一种继传统手术、化疗、放疗后新的理想的肿瘤治疗方法。

但是目前，针对endoglin单克隆抗体的研究还不够多，研究也不够充分，有待于进一步的开发相应的药物。

3.发明内容

本发明克服现有技术的缺陷，提供了一种治疗大肠癌的新方法。

首先，本发明提供一种特异性针对endoglin的单克隆抗体。

其次，本发明提供了针对endoglin的单克隆抗体F15，轻链可变区的氨基酸序列：

DLVMTQTAPSVPVTPGESVSISCRSTVCREMYDAWLWLYWFLQRPGQSPQLLIYQHCNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCATGICLNGYFGSGTKLEIK

重链可变区的氨基酸序列：

VKPGGSLKLSCAASQSHDPMPRMSWVRQTPDKRLEWVAITIACYLGKYYPDSVKGRFTISRDQDKQTLYLQMSSLKSEDTAMYYCWGTKGICFVEEWGQGTTVTVS

最后，本发明提供了针对endoglin的单克隆抗体在制备用于治疗大肠癌的药物组合物中的用途。

4.发明优点

本发明针对endoglin制备了特异性的单克隆抗体，该单克隆抗体能够有效的抑制大肠癌细胞的增殖以及能够通过抑制endoglin的活性来直接调节其下游的TGF‑β1的表达。紫杉醇/白蛋白纳米粒子与endoglin特异性单克隆抗体联用，能够有效的提高肿瘤抑制率，具有较好的治疗效果。

5.实用性对照实验

实施例：白蛋白紫杉醇联合单抗治疗实验

结直肠癌细胞系HCT116细胞株接种于无菌培养瓶中，加入含10％小牛血清、100×103U/L青霉素、100×103U/L链霉素的RPMI1640培养基中，于37℃恒温、5％CO2及饱和湿度培养箱中培养，细胞呈单层贴壁生长，每3～4d传代1次，传代时用0 .02％EDTA消化3min，以培养液吹打制成细胞悬液，按所需浓度接种。荷瘤动物模型的建立：将HCT116细胞于BALB/C裸小鼠右侧近腋部皮下接种，接种量0 .2ml细胞悬液，细胞总数为2×107个。实验分组及处理：将小鼠随机分为2组，每组10只，雌雄各半。

①抗体组：在接种HCT116细胞的同时，经腹腔注射endoglin单克隆抗体F15 100μg，0.2ml，每周加强1次；

②生理盐水组：在接种HCT116细胞的同时，经腹腔注射生理盐水，为0 .2ml，生理盐水每周加强1次；

③白蛋白紫杉醇组：在接种HCT116细胞的同时，经腹腔注射紫杉醇白蛋白纳米粒子100μg，0.2ml，每周加强1次；

④白蛋白紫杉醇联合单抗治疗组：在接种HCT116细胞的同时，经腹腔注射紫杉醇白蛋白纳米粒子100μg，0 .1ml；间隔2h后注射抗体F15 100μg，0 .2ml，每周加强1次；

⑤阳性对照组：在接种HCT116细胞的同时，经腹腔注射LY364947 100μg，0 .2ml，每周加强1次；

治疗3周后，应用游标卡尺量皮下肿瘤的大小。用游标卡尺测量荷鼠肿瘤最大的前后径(a)、左右径(b)、上下径(c)1次，三径相互垂直，记录体积变化。瘤体积计算方法：荷鼠肿瘤体积(mln)：a×b×c×π/6。抑瘤率＝生理盐水对照组平均肿瘤体积‑治疗组平均肿瘤体积/生理盐水对照组平均肿瘤体积×100％。

从下图的实验结果显示F15抗体组、白蛋白紫杉醇组、阳性对照组以及白蛋白紫杉醇联合F15单抗组较生理盐水组肿瘤的生长受到明显抑制，差异显著(P<0 .05)。从下图的结果也可以看出，白蛋白紫杉醇联合F15单抗治疗具有协同的更好的促进的治疗效果，其肿瘤抑瘤率达到(96.8±2.63)％。

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